本文目录一览

1，pcr引物要多长才具有特异性呀4bp的引物随机出现概率为256分之一

PCR引物一般是18-25bp吧，没见过用10-12个做PCR的，退火温度太低了，特异性差。 4bp随机引物，每一个bp都有AGCT四种可能，所以一共是4*4*4*4=256种可能。那么，某一种特定序列的出现概率就是1/256。
最少得6个碱基 推荐8——15个 一般选10个到12个

pcr引物要多长才具有特异性呀4bp的引物随机出现概率为256分之一

2，什么是实时荧光定量PCR有什么应用领域与传统PCR有什么区别

．荧光共振能量传递 (FRET)某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光，当另一屏蔽基团与其距离合适时，原发射光将会被屏蔽基团所吸收，并转化为其他波长的发射光或热能，称之为FRET。2．荧光化学：荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5－3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。二．实时荧光PCR技术靶基因的确定及引物和探针的设计原则1．靶基因的确定：选择检测组共有的基因以避免检测的假阴性(漏检)。2．检测片段的确定：选择检测组内的保守 (突变少)（避免假阴性）、组间特异的序列 (突变多)（避免假阳性）作为引物探针的设计位置。片段长度70-150bp。3．引物：长度17-25bp;GC含量30-80%;退火温度(Tm值)58-60℃；避免稳定的引物二聚体（特别是多联检测）及发夹结构(自由能大于-3.5kc/m)；序列不能出现连续的G，3端避免G或C，最后5个碱基内避免两个以上的G或C。4．探针：长度20-30bp（Taqman)或16-25bp(MGB)；GC含量30-80%；Tm值为68-70℃；避免稳定的二聚体及发夹结构 (自由能大于-3.5kc/m)；5端不能是G；位置尽量靠近上游引物；选择波长差异较大（多联检测）或Fam(单联检测）的荧光标记。三.特点和优势1．特异性强：引物和探针的“双保险”，避免检测的假阳性。2．灵敏度高：分析PCR产物的对数期，自动化仪器收集荧光信号，避免了许多人为因素干扰。3．避免污染：全封闭反应，无须PCR后处理。4．实现定量：运用标准品获得标准曲线，结合Ct值进行准确定量。5．高效低耗：可实现一管多检。6．操作简便：在线式实时监测扩增结果，不必接触有害物质。7．快速：反应时间<1.5小时。四．实用意义：1．提高检测效率，缩短检测周期，提高通关速度；2．降低检测成本，提高经济与社会效益。

什么是实时荧光定量PCR有什么应用领域与传统PCR有什么区别

3，那位知道DNA 荧光探针的PCR标记方法用什么酶最好

荧光共振能量传递 (FRET) 某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光，当另一屏蔽基团与其距离合适时，原发射光将会被屏蔽基团所吸收，并转化为其他波长的发射光或热能，称之为FRET。 2．荧光化学： 荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5－3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。 二．实时荧光PCR技术靶基因的确定及引物和探针的设计原则 1．靶基因的确定：选择检测组共有的基因以避免检测的假阴性(漏检)。 2．检测片段的确定：选择检测组内的保守 (突变少)（避免假阴性）、组间特异的序列 (突变多)（避免假阳性）作为引物探针的设计位置。片段长度70-150bp。 3．引物：长度17-25bp;GC含量30-80%;退火温度(Tm值)58-60℃；避免稳定的引物二聚体（特别是多联检测）及发夹结构(自由能大于-3.5kc/m)；序列不能出现连续的G，3端避免G或C，最后5个碱基内避免两个以上的G或C。 4．探针：长度20-30bp（Taqman)或16-25bp(MGB)；GC含量30-80%；Tm值为68-70℃；避免稳定的二聚体及发夹结构 (自由能大于-3.5kc/m)；5端不能是G；位置尽量靠近上游引物；选择波长差异较大（多联检测）或Fam(单联检测）的荧光标记。 三.特点和优势 1．特异性强：引物和探针的“双保险”，避免检测的假阳性。 2．灵敏度高：分析PCR产物的对数期，自动化仪器收集荧光信号，避免了许多人为因素干扰。 3．避免污染：全封闭反应，无须PCR后处理。 4．实现定量：运用标准品获得标准曲线，结合Ct值进行准确定量。 5．高效低耗：可实现一管多检。 6．操作简便：在线式实时监测扩增结果，不必接触有害物质。 7．快速：反应时间<1.5小时。 四．实用意义： 1．提高检测效率，缩短检测周期，提高通关速度； 2．降低检测成本，提高经济与社会效益。
PCR技术是利用两种寡核苷酸引物，分别与双链DNA片段的两端互补，形成DNA聚合酶反应中的模板和引物的关系，这就是PCR技术的核心。普遍引物设计用TaqDNA聚合酶。
病毒量是1.61*10的6次方 应该治疗一下 哈医大四院乙肝生物治疗中心为你解答 望采纳或追问

那位知道DNA 荧光探针的PCR标记方法用什么酶最好


文章TAG：25bp  是什么  什么  什么意思  25bp的bp是什么意思  
下一篇